Autochthonous canine visceral leishmaniasis cases occur in Paraná state since 2012: isolation and identification of Leishmania infantum / Leishmaniose visceral canina autóctone ocorre no estado do Paraná desde 2012: isolamento e identificação de Leishmania infantum

Abstract The aim of this study was to confirm the emergence of canine visceral leishmaniasis among dogs in Foz do Iguaçu. The disease was diagnosed through the isolation and molecular identification of Leishmania infantum. In the first sample collection stage (2012), three lymph node aspirates and 46 buffy coat samples were obtained mostly from the dogs that were seroreagents for leishmaniasis. In the second sample collection stage (2013), the buffy coat samples were collected from 376 dogs located close to Paraguay, Paraná river, center and peripheral parts of the city. The DNA from the six isolates, four from the first sampling stage (4/49) and two from the second sampling stage (2/376), was subjected to polymerase chain reaction using the K26F/R primers. The isolate was confirmed as L. infantum by sequencing. As none of the dogs had ever left the city, the isolates were confirmed as autochthonous. Further, the study confirmed the emergence of canine visceral leishmaniasis in Paraná through the identification of L. infantum among dogs in Foz do Iguaçu city. Hence, collaborative control measures should be designed and implemented by the public agencies and research institutions of Brazil, Argentina, and Paraguay to control the spread of visceral leishmaniasis.

Resumo O objetivo deste estudo foi confirmar a emergência da leishmaniose visceral canina em Foz do Iguaçu próximo à fronteira com a Argentina e ao Paraguai, por meio do isolamento e identificação molecular de Leishmania infantum. Em um primeiro estágio de coleta de animais (2012), três amostras de aspirados de linfonodos e 46 camadas leucocitárias foram obtidas de cães soropositivos para leishmaniose. Em um segundo estágio de coleta (2013), foram coletadas amostras de camada leucocitária de 376 cães de 20 localidades próximas à fronteira com o Paraguai, rio Paraná, centro e periferia da cidade. Seis isolados foram obtidos, quatro da primeira etapa (4/49) e dois da segunda etapa (2/376); estes isolados foram submetidos à amplificação com iniciadores K26F/R, e a análise de sua sequência confirmou a espécie como L. infantum. A autoctonia dos casos foi confirmada, pois 100% dos cães nunca haviam saído da cidade. O estudo confirma a emergência de leishmaniose visceral canina no Paraná com identificação de L. infantum em cães da cidade de Foz do Iguaçu. Assim, medidas de controle devem ser elaboradas e implementadas por órgãos públicos e instituições de pesquisa do Brasil, Argentina e Paraguai em parceria com o objetivo de controlar a disseminação de zoonoses e os casos humanos de LV.

Epidemiological relevance of dogs for the prevention of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Leptospira spp / Relevância epidemiológica de cães para a prevenção de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leptospira spp

Abstract This study evaluated the seroprevalence of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Leptospira spp. in dogs from Foz do Iguaçu, Paraná, Brazil. Indirect immunofluorescent antibody test was used to detect antibodies anti-T.gondii and anti-N. caninum. Immunoenzymatic assay and microscopic serum agglutination were used for screening antibodies anti-T.gondii and anti-Leptospira spp., respectively. The results were: 67.02% of the samples reactive for T.gondii and 1.38% for N. caninum, both without statistically significant variables. For Leptospira spp. the results indicated seroprevalence of 23.11%. The analysis of the variables without distinction of serovar showed association for intrinsic characteristics as breed, age, nutritional status and dog category. The extrinsic variables as city region and access to the street presented association (p<0.05). The most prevalent serovars were: Canicola 59.47%; Bratislava 13.07% and Butembo 15.68%. Variables that make up the adjusted multiple analysis model using Leptospira spp. were: age, breed and nutritional status; serovar Canicola, sex, nutritional status and area (p<0.05); serovar Bratislava, lymphadenomegaly and presence of fleas (p<0.05). Given the results obtained, dogs can be used as sentinels for toxoplasmosis and leptospirosis in Foz do Iguaçu and other cities with similar outcomes. In addition, preventive measures should be taken by health authorities because they are zoonoses and humans are also at risk.

Resumo Este estudo avaliou a soroprevalência de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leptospira spp. em cães de Foz do Iguaçu, Paraná, Brasil. O teste de imunofluorescência indireta foi utilizado para detectar anticorpos anti-T. gondii e anti-N. caninum. Ensaio imunoenzimático e soroaglutinação microscópica foram utilizados para pesquisa de anticorpos anti-T. gondii e anti-Leptospira spp., respectivamente. Os resultados obtidos foram: 67,02% (435/649) das amostras reativas para T. gondii e, 1,38% (9/649) para N. caninum, ambas com ausência de variáveis significativas estatisticamente. Para Leptospira spp. os resultados indicaram soroprevalência de 23,11% (153/649). A análise das variáveis sem distinção de sorovar mostraram associação para caraterísticas intrísecas como raça, idade, estado nutricional e categoria de cães. Para as variáveis extrínsecas, a região da cidade e ter acesso à rua mostraram associação estatística (p<0,05). Os sorovares mais prevalentes foram: Canicola com 59,47% (91/153); Bratislava 13,07% (20/153) e Butembo 15,68% (24/153). As variáveis que compõem o modelo de análise multivariada ajustada usando como desfecho Leptospira spp. foram: idade, raça, estado nutricional e área. Para o sorovar Canicola, as variáveis significantes (p<0,05) foram sexo, estado nutricional e área; para o sorovar Bratislava, as variáveis significantes (p<0,05) foram linfadenomegalia e presença de pulgas. Dos resultados obtidos, cães podem ser usados como sentinelas para infecção por T. gondii e Leptospira spp. na cidade de Foz do Iguaçu e em outras cidades com desfechos similares. Além disso, medidas preventivas devem ser tomadas pelas autoridades de saúde, pois são zoonoses e os seres humanos também estão em risco.

Variables associated with the prevalence of anti-Leishmania spp. antibodies in dogs on the tri-border of Foz do Iguaçu, Paraná, Brazil / Variáveis associadas à prevalência de anticorpos anti- Leishmania spp. em cães na tríplice fronteira de Foz do Iguaçu, Paraná, Brasil

Abstract The aim of this study was to investigate the occurrence of anti-Leishmania spp. antibodies in dogs from localities in the city of Foz do Iguaçu, Paraná state, Brazil, on the border with Argentina and Paraguay. Blood samples dogs were collected to perform the following serologic tests: immunochromatographic DPP® rapid test, indirect immunoenzymatic assay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA). In 2012, 285 dogs were analyzed on Argentina border, and in 2013, serum samples from 396 dogs on the border of Paraguay were collected. Using ELISA for screening and IFA for the confirmatory test, the results showed that the antibody prevalence was 1.8% (5/285) on the border of Argentina and 3.0% (12/396) on Paraguay border. When using the DPP® for screening and ELISA as a confirmatory analysis, we observed a seroreagent prevalence in dogs of 2.5% (7/285) on Argentina border and 5.1% (20/396) on Paraguay border. The non-public collection of domestic waste (p= 0.0004) was shown to be associated with leishmaniasis. This study shows the presence of leishmaniasis and suggest the emergence of canine visceral leishmaniasis in state of Paraná due to the confirmed occurrence of seroreactive dogs on Argentina and Paraguay border, which has environmental and geographical characteristics that favor the spread of the parasite.

Resumo O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de anticorpos anti- Leishmania spp. em cães da cidade de Foz do Iguaçu, estado do Paraná, Brasil, fronteira com a Argentina e o Paraguai. Amostras de sangue de cães foram coletadas para realização dos seguintes testes sorológicos: teste rápido imunocromatográfico DPP®, ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e ensaio de imunofluorescência indireta (IFI). Em 2012, 285 cães foram analisados na fronteira com Argentina e, em 2013, amostras de soro de 396 cães na fronteira com o Paraguai. Utilizando ELISA para triagem e IFA para o teste confirmatório, os resultados mostraram uma prevalência de anticorpos de 1,8% (5/285) na fronteira da Argentina e 3,0% (12/396) na fronteira com o Paraguai. Ao usar o DPP® para triagem e ELISA como uma análise confirmatória, observou-se uma prevalência de cães sororreagentes de 2,5% (7/285) na fronteira com a Argentina e 5,1% (20/396) na fronteira com o Paraguai. A não coleta pública de lixo doméstico (p = 0,0004) mostrou-se associada à leishmaniose. Este estudo demonstra a presença de leishmaniose e sugere a emergência da leishmaniose visceral canina no estado do Paraná devido à ocorrência de cães sororreagentes na fronteira Argentina e Paraguai, que possuem características ambientais e geográficas que favorecem a disseminação do parasito.